Диагностика хламидиоза.
Методы иммуноферментного анализа

Эти методы основаны на обнаружении растворимого антигена хламидий в исследуемых пробах. Чаще используются наборы реактивов Imx Select Хламидия (Abbott Laboratories) и Chlamydia-antigen Elisa (Medac Diagnostica).

Методика:

Тест Imx Select Хламидия основан на технологии ИФА-анализа на микрочастицах (МИФА) и предназначен для качественного определения липолисахаридного антигена C. trachomatis в эндоцервикальных и уретральных мазках на анализаторе Imx. Данный набор содержит компоненты, полученные из человеческого материала, что обуславливает соблюдение при работе правил биологической безопасности.

Узел проотборник/электрод добавляет микрочастицы в лунку, содержащую образец. Предварительно экстрагированный липолисахаридный антиген (ЛПС) образца связывается с микрочастицами. Аликвота реакционной смеси, содержащей комплексы микрочастиц с ЛПС антигеном, переносится на стекловолокнистый матрикс реакционной ячейки.

Микрочастицы необратимо связываются с матриксом. К матриксу добавляются кроличьи антитела против хламидии. Они связываются с ЛПС антигеном. Биотинилированные козьи анти-кроличьи антитела добавляются к матриксу и связываются с комплексом анти-хламидия/ЛПС антиген. К матриксу добавляется конъюгат щелочной фосфатазы и антител против биотина. Происходит связывание конъюгата с комплексом антиген/ антитело. После удаления не связавшегося материала промыванием к матриксу добавляется субстрат 4-метилумбеллиферилфосфат. Образование флуоресцирующего продукта измеряется в оптическом узле МИФА.

Тест-система Сhlamydia-Antigen-ELISA medac (регистрационное удостоверение Минздрава РФ № 97/128 от 07.02.97 г.) является экономным и в то же время достаточно специфичным и чувствительным методом в рутинной диагностике хламидийной инфекции. Этот тест представляет собой метод твердофазного ИФА-анализа для определения антигенов хламидий. Твердая фаза покрыта хламидийными моноклональными антителами установленной специфичности. Амплификация достигается с использованием технологии полимерной конъюгации, в результате чего происходит фиксация, при которой на каждый связанный участок антигена приходится полимерный комплекс с высокомолекулярным фрагментом.

Кроме того, амплификация выполняется на стадии обозначенного воспроизведения с использованием запатентованной технологии фермент-амплификации. Визуально положительные пробы окрашиваются в желто-оранжевый цвет. Интенсивность окраски пропорциональна количеству антигена хламидии. Точный результат исследования определяют с помощью микроЭВМ, спектрофотометра “Мультискан” или другого аппарата для ИФА при длине волны 492 нм. Образцы дающие значения поглощения выше или равные значению отсекающего поглощения (cut-off), считаются положительными для хламидии. Чувствительность и специфичность ИФ методов соответственно составляет 65-70% и 90-100% . Показания к применению такие же , как и для метода прямой иммунофлюресценции.

Выявление в сыворотке крови антител к липополисахаридному антигену хламидий класов Ig G, Ig A, Ig M с определением их титра позволяет определить стадию заболевания, обосновать необходимость антибактериального лечения и оценить его эффективность.

Показания к выявлению антихламидийных антител классов Ig G, Ig A, Ig M в сыворотке крови методом ИФА:

1. Определение стадии заболевания:
   • острая, первичная;
   • хроническая;
   • реактивация или реинфекция;
   • состояние после реконвалесценции (остаточная серология).
2. Оценка эффективности проводимого лечения (наряду с исследованием методами ПЦР, культурального посева).
3. Установление хламидийной этиологии экстрагенитальных поражений (артриты, пневмонии, заболевания глаз).

Тест-системы:

Cравнивая различные диагностические наборы мы рекомендуем использовать тест-систему r-Elisa фирмы MEDAC DIAGNOSTICA (Германия). Регистрационное удостоверение Минздрава РФ №97 от 7.02.97 г. Это иммуноферментные наборы для выявления антихламидийных антител классов Ig G, Ig A, Ig M с определением их количественного титра в сыворотке крови по одной точке. Антиген получен методами генной инженерии. В качестве антигена твердой фазы используется специфические рекомбинантные липополисахаридные фрагменты хламидий, отсутствующие в липополисахаридах других бактерий. Выбирая тест-систему, где в качестве антигена используются липополисахаридные фракции, мы исходили из предположения, что обследуемое лицо может в течении жизни подвергаться инфицированию не только C.trachomatis, но и C.pneumonia , и C.psitacci с выработкой к ним соответствующих антител. Выявление их количественного титра и его динамики является важнейшим показателем эффективности проводимого лечения.

Интерпретация результатов:

В промежутке между пятым и двадцатым днями после появления клинических симптомов заболевания последовательно возникают антитела этих трех классов к специфическому хламидийному липополисахариду. Ig M является маркером острой стадии, он определяется уже через пять дней после начала заболевания. Изменения продуцирования Ig M на определяемое продуцирование Ig A может происходить в течение 10 дней после появления симптомов заболевания. В течение короткого периода могут одновременно присутствовать Ig M и Ig A. В это же время или с небольшой задержкой -- 2-3 недели могут быть определены IgG. Прогрессирование заболевания, переход в хроническую стадию характеризуется появлением Ig A, Ig G- антител.