Диагностика хламидиоза.
Иммуноморфологические методы
Эти методы основаны на обнаружении антигенных субстанций хламидий в эпителии и других тканях путем обработки препаратов специфическими антителами. Антитела диагностической антихламидийной сыворотки соединены с какой-либо меткой -- люминесцирующей (ФИТЦ-антитела) или ферментной (энзим-меченые антитела).
Прямая иммунофлюоресценция (ПИФ)
Этот метод предусматривает прямое выявление антигенов хламидий. При люминесцентной микроскопии включения хламидий определяются в виде зеленой или желто-зеленой флюоресценции включений на коричнево-оранжевом фоне цитоплазмы клеток. Включения могут иметь зернистую гомогенную или смешанную структуру.
Показания:
- Острая фаза заболевания.
- Хроническая фаза заболевания.
- Установление этиологии хронического инфекционного процесса урогенитального тракта.
- Беременность с отягощенным акушерским анамнезом.
- Бесплодие неясного генеза.
Диагностическая информативность ПИФ связана с тем, что с ее помощью выявляются не только корпускулярные, но и растворимые антигены хламидий. Этот метод не зависит от возможного изменения тинкториальных свойств микроорганизма в процессе заболевания и лечения.
ПИФ-метод является важнейшим скриннинговым методом диагностики урогенитального хламидиоза.
Его чувствительность и специфичность при использовании моноклональных антител составляет соответственно 65-90% и 85-90%.
При оценке результатов следует учитывать, что только показатели внутриклеточной флюоресценции могут оцениваться в качестве положительного результата этого теста при использовании поликлональных антихламидийных антител, при использовании моноклональных -- результат считают при наличии 10 ЭТ в пользе зрения.
Cоскобные препараты готовят также, как и для цитоскопических исследований.
Методика:
Выпускают диагностические наборы, содержащие моноклональные антитела для ПИФ, следующие фирмы: Syva, Difco, Kallastad, Bartrels, Boots celltech, California Integrated Diagnostics, Orion Diagnostica. Реагенты фирм Syva, Difco, Kallastad представляют собой меченные ФИТЦ моноклональные антитела к основному белку наружной мембраны хламидий, а реагенты других фирм -- моноклональные антитела к родоспецифическому хламидийному липолисахариду (ЛПС). В России ЗАО “НИАРМЕДИК плюс” при НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН выпускает моноклональные антитела к ЛПС хламидий, которые успешно конкурируют с продукцией иностранных фирм по качеству продукции. Это набор “Хламоноскрин” для определения моноклональных антител к родоспецифическому липополисахаридному антигену и набор “Хламоноскрин-2” для определения моноклональных антител к видоспецифическому белковому антигену хламидии трахоматис. Наборы имеют ФС 42-359598 и регистрационное удостоверение Минздрава России 93/270/9.
Моноклональные антитела отличаются друг от друга по вызываемой яркости свечения, постоянству выявляемых форм ЭТ и степени специфичности. Для диагностики хламидий этим методом необходим люминесцентный микроскоп.
Применение:
В целом, метод ПИФ отвечает критериям высокой чувствительности и специфичности, но требует исполнения опытным, компетентным лабораторным работником.
Высококвалифицированная экспертная оценка методом ПИФ редко бывает доступной, поэтому средняя чувствительность его снижается. Метод недостаточно чувствителен и для стабильного определения малых количеств ЭТ. К тому же невозможно проверить и отрицательные результаты, и, следовательно, обнаружить среди них ложноотрицательные, что приводит к снижению чувствительности.
Непрямой метод иммунофлюресценциии
Непрямой метод иммунофлюресценции применяют в тех случаях, когда нет в наличии ФИТЦ-конъюгата антихламидийных антител. В этих случаях приготовленный тем же методом, что и для ПИФ препарат из клинических проб обрабатывают вначале антихламидийными антителами, полученными путем иммунизации хламидиями овец, кроликов, мышей или других животных, а затем второй сывороткой, специфичной для вида животного, которое было иммунизировано хламидиями. Антитела второй сыворотки конъюгированы с ФИТЦ. Показания к применению и специфичность данного метода совпадают с ПИФ.
|
